1)分選和凍存:用細胞分選儀對單采產物APH進行T細胞分選純化,藥明巨諾的工藝能夠將T細胞的純度提高到99%,以保障后續(xù)工藝的穩(wěn)健性。純化的中間產物會經過程序降溫儀降溫,儲存于氣相液氮罐,準備進入后續(xù)生產工藝。
2)激活:技術人員從液氮罐中取出中間產物后,加入激活磁珠,完成T細胞激活,并置于二氧化碳培養(yǎng)箱進行激活培養(yǎng)。
3)轉導:激活后的T細胞完成慢病毒載體的CAR轉導。慢病毒可以轉導分裂期及非分裂期細胞,轉導效率高。其次從整合偏好性角度,慢病毒偏好整合非編碼區(qū),相對安全。
4)擴增:轉導后的T細胞接種于生物反應器進行擴增工序,生物反應器采用封閉式自動化的動態(tài)擴增體系,以實現密閉生產環(huán)境及動態(tài)過程監(jiān)控,灌流模式培養(yǎng)也比較有利于細胞增殖。整個擴增工序大概在5天左右。
5)收獲:擴增使CAR-T細胞達到收獲標準后進行收獲工序。收獲標準包括活細胞數、轉導效率、體外效價、T細胞純度。收獲工序包括清洗、去磁珠。
6)分裝:在生物安全柜內完成,分裝的CAR-T產品被保存于氣相液氮罐中,放行質檢合格后通知臨床做回輸準備。
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